2019年12月，在中国武汉，出现了一种由先前未知的病原体引起的新型肺炎。最初的病例与武汉市海鲜市场的暴露有关。该病原体很快被鉴定为新型冠状病毒（2019-nCoV），与严重急性呼吸系统综合症冠状病毒（SARS-CoV）密切相关。目前，尚无针对这种新病毒的特异性治疗方法。因此，迫切需要找到有效的抗病毒药物来对抗这种疾病。
2020年2月4日，中科院武汉病毒所肖庚富，胡志红及军事医学科学院毒物药物研究所钟武共同通讯在Cell Research 在线发表题为“Remdesivir and chloroquine effectively inhibit the recently emerged novel coronavirus (2019-nCoV) in vitro”的研究论文，该研究发现Remdesivir和氯喹在体外控制2019-nCoV感染方面非常有效。由于这些化合物已用于具有安全跟踪记录的人类患者，并且显示出对各种疾病的有效效果，因此研究人员建议应在患有新型冠状病毒疾病的人类患者中对它们进行评估。
2019年12月，在中国武汉，出现了一种由先前未知的病原体引起的新型肺炎。最初的病例与武汉市海鲜市场的暴露有关。截至2020年1月27日，中国当局报告在中国大陆确诊2835例病例，包括81例死亡。此外，在香港，澳门和台湾发现了19例确诊病例，在泰国，日本，韩国，美国，越南，新加坡，尼泊尔，法国，澳大利亚和加拿大发现了39例病例。该病原体很快被鉴定为新型冠状病毒（2019-nCoV），与严重急性呼吸系统综合症冠状病毒（SARS-CoV）密切相关。目前，尚无针对这种新病毒的特异性治疗方法。因此，迫切需要找到有效的抗病毒药物来对抗这种疾病。
药物发现的有效方法是测试现有的抗病毒药物是否有效治疗相关的病毒感染。 2019-nCoV属于Betacoronavirus，也包含SARS-CoV和中东呼吸综合征CoV（MERS-CoV）。 SARS或MERS患者使用了几种药物，例如利巴韦林，干扰素，洛匹那韦-利托那韦，皮质类固醇，尽管某些药物的疗效尚存争议。在这项研究中，研究人员评估了五种FAD批准药物的抗病毒药物包括利巴韦林，喷昔洛韦，硝唑尼特，那法莫司他，氯喹和两种针对2019-nCoV临床分离株的广谱抗病毒药物瑞地昔韦（GS-5734）和法维拉韦（T-705）。
进行标准测定以测量这些化合物对2019-nCoV的细胞毒性，病毒产量和感染率的影响。首先，通过CCK8分析确定候选化合物在Vero E6细胞（ATCC-1586）中的细胞毒性。然后，在不同浓度的测试药物存在下，以0.05的感染复数（MOI）用nCoV-2019 BetaCoV / Wuhan / WIV04 / 20192感染Vero E6细胞，在对照中使用DMSO。通过定量实时RT-PCR（qRT-PCR）定量细胞上清液中的病毒拷贝数来评估疗效，并在感染后（pi）48h通过免疫荧光显微镜通过可视化病毒核蛋白（NP）的表达进行确认（细胞病变）。
在这7种受试药物中，高浓度的三种核苷类似物包括利巴韦林（半数最大有效浓度（EC50）= 109.50μM，半细胞毒性浓度（CC50）> 400μM，选择性指数（SI）> 3.65），喷昔洛韦（EC50为了减少病毒感染，需要=95.96μM，CC50 ＝>400μM，SI +> 4.17）和favipiravir（EC50 ＝61.88μM，CC50>400μM，SI +> 6.46）。然而，尽管依维拉韦在Vero E6细胞中的EC50值高达67μM，但已显示出100％的有效保护小鼠抵抗埃博拉病毒攻击的能力，表明建议进行进一步的体内研究以评估这种抗病毒核苷。
Nafamostat是一种有效的MERS-CoV抑制剂，可防止膜融合，可抑制2019-nCoV感染（EC50 = 22.50µM，CC50> 100µM，SI> 4.44）。硝唑尼特（Nitazoxanide）是一种具有商业潜力的原生动物药物，可对包括人和动物冠状病毒在内的多种病毒具有抗病毒潜力，可在低微摩尔浓度下抑制2019-nCoV（EC50 = 2.12μM; CC50> 35.53μM; SI> 16.76）。建议对该药物针对2019-nCoV感染进行进一步的体内评估。值得注意的是，两种化合物瑞德斯韦（EC50 =0.77μm; CC50>100μM; SI> 129.87）和氯喹（EC50 =1.13μM; CC50>100μM，SI> 88.50）在低微摩尔浓度下有效地阻断了病毒感染并显示出高SI 。
瑞姆斯韦及氯喹作用效果
Remdesivir最近被公认为是针对培养细胞，小鼠和非人类灵长类动物（NHP）模型中的多种RNA病毒（包括SARS / MERS-CoV）感染的有前途的抗病毒药物。目前正在临床研究中，用于治疗埃博拉病毒感染。Remdesivir是一种腺苷类似物，可整合到新生的病毒RNA链中并导致过早终止。分析表明remdesivir在一个阶段起作用（病毒进入后），与其作为核苷酸类似物的推定抗病毒机制相符。结果表明，在NHP模型中，静脉内施用10μmg/ kg剂量的瑞德昔韦可导致其活性形式在血液中持续存在水平（10μm），并提供100％的埃博拉病毒感染防护。数据表明，EC90值在Vero E6细胞中针对2019-nCoV的瑞德昔韦为1.76μm，表明在NHP中可能达到其工作浓度。另外该研究表明，瑞德昔韦还可以有效抑制人细胞系（人肝癌Huh-7细胞）中的病毒感染。
氯喹是一种广泛使用的抗疟疾和自身免疫性疾病药物，最近被报道为潜在的广谱抗病毒药物。氯喹通过增加病毒/细胞融合所需的内体pH来阻断病毒感染。加药时间分析表明，氯喹在Vero E6细胞中在2019-nCoV感染的进入和进入后阶段均起作用。除了其抗病毒活性外，氯喹还具有免疫调节活性，可在体内协同增强其抗病毒作用。口服后，氯喹广泛分布于整个身体，包括肺。氯喹对Vero E6细胞中2019-nCoV的EC90值为6.90μM，这是临床上可实现的。氯喹是一种便宜且安全的使用了70多年的药物，因此，它可能在临床上适用于2019-nCoV。
该研究表明，Remdesivir和氯喹在体外控制2019-nCoV感染方面非常有效。由于这些化合物已用于具有安全跟踪记录的人类患者，并且显示出对各种疾病的有效效果，因此研究人员建议应在患有新型冠状病毒疾病的人类患者中对它们进行评估。
参考消息：
https://www.nature.com/articles/s41422-020-0282-0